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第一部分 基础知识3

第一章 实验室安全防护知识3

一、化学试剂安全防护知识3

二、放射性核素安全防护知识5

三、生物安全知识7

四、用电安全及其他安全知识13

第二章 分子生物学实验室标准及功能分区15

一、生物学约束15

二、物理学约束15

三、标准实验室的组成16

第三章 分子生物学实验室常规仪器设备18

一、紫外分光光度计18

二、离心机21

三、制水系统24

四、PCR仪27

五、凝胶成像系统29

六、酶标仪30

七、微量移液器32

八、pH计34

九、生物安全柜35

十、超净工作台36

十一、凝胶电泳系统37

十二、高压蒸汽灭菌器39

十三、液氮罐41

第四章 实验基本技能与实验室常规基础知识42

一、常用器材的清洗处理42

二、实验用品及实验环境的消毒灭菌44

三、细菌接种技术49

四、细菌培养技术51

五、细胞培养技术54

六、实验材料的采集与处理59

七、试剂及样品的保存63

八、溶液的混匀法66

九、实验室废弃物的处理66

第二部分 实验71

实验一 质粒DNA的提取及鉴定71

实验二 构建重组质粒EGFP/pET-28a78

实验三 阳性克隆的筛选与鉴定87

实验四 IPTG诱导EGFP蛋白表达92

实验五 SDS-PAGE蛋白质电泳98

实验六 重组蛋白的分离与纯化105

实验七 多克隆抗体的制备114

实验八 间接ELISA法测定抗体效价121

实验九 Western blotting检测抗体含量126

参考文献136

附录139

附录一 核酸及蛋白质数据139

附录二 分子克隆中常用缓冲液与试剂的配制142

1．Tris缓冲液142

2．磷酸缓冲液143

3．电泳缓冲液和上样缓冲液144

4．其他常用缓冲液148

附录三 常用贮存液的配制151

附录四 常用酶的配制156

1．溶菌酶156

2．蛋白水解酶类156

3．无DNA酶的RNA酶157

附录五 细菌培养基、抗生素的配制158

1．常用培养基158

2．常用抗生素溶液160

附录六 溴化乙锭（EB）的净化处理161

1．EB浓溶液（即质量浓度＞0.5 g/L）的净化处理161

2．EB稀溶液（如含有0.5 mg/L EB的电泳缓冲液）的净化处理161

3．其他处理方法162

附录七 常用试剂的作用163

1．水饱和酚溶液去除蛋白质的原理163

2．溶液Ⅰ：溶菌液163

3．溶液Ⅱ：NaOH-SDS液163

4．溶液Ⅲ：3 mol/L NaAc（pH 4.8）溶液164

5．无水乙醇沉淀DNA的原理164

6．乙醇沉淀DNA时，加NaAc或NaCl的作用164

7．使用乙醇沉淀DNA，降温保存的作用与方式164

8．加DNase降解核糖核酸后再用SDS与KAc处理的原因165

9．在保存或抽提DNA过程中，用TE缓冲液的作用165

10．抽提DNA去除蛋白质时使用酚与氯仿的方法165

11．用酚与氯仿抽提DNA时还要加少量异戊醇的原因166

12．pH 8的Tris水溶液饱和酚的作用原理166

附录八 常见载体图谱167

1．GST融合表达载体167

2．His标签融合表达载体168

3．真核表达载体169

4．RNA干扰载体171

5．酵母表达载体172

6．T载体173